NCAM-L1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401012-ACT

L1CAM codifica a NCAM-L1 (L1), uma molécula de adesão celular neuronal que medeia interações homofílicas e heterofílicas para regular o crescimento de neuritos, a orientação axonal, a migração neuronal e a plasticidade sináptica. Por meio do acoplamento a adaptadores do citoesqueleto e a nós de sinalização, a NCAM-L1 influencia vias que controlam a dinâmica de adesão, a motilidade do cone de crescimento e processos ligados a MAPK/ERK e PI3K, que moldam o desenvolvimento dos circuitos neurais. No sistema nervoso, alterações na expressão ou na função de L1CAM estão associadas a fenótipos de neurodesenvolvimento e também foram relatadas em contextos de motilidade de células tumorais e comportamento invasivo, sustentando seu valor para estudos mecanísticos de sinalização dependente de adesão. Essas propriedades tornam L1CAM um alvo útil para dissecar programas de interação célula–célula e seus desfechos transcricionais e morfológicos a jusante.

NCAM-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de L1CAM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NCAM-L1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus L1CAM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição L1CAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NCAM-L1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus L1CAM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NCAM-L1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NCAM-L1 em células tumorais com expressão de L1CAM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.