Plasmide CRISPR/Cas9 KO N-type Ca++ CP α1B (m): sc-419401
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- N-type Ca++ CP α1B Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique N-type Ca++ CP α1B, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: N-type Ca++ CP α1B Antibody (A-2): sc-377489
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO N-type Ca++ CP α1B (m) | sc-419401 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Cacna1b code la sous-unité α1B formant le pore des canaux calciques de type N (CaV2.2), un canal calcique activé à haut voltage, enrichi aux terminaisons présynaptiques, où il couple la dépolarisation membranaire à l’entrée de Ca²⁺ et à la libération de neurotransmetteurs. L’activité de CaV2.2 s’intègre à la machinerie d’exocytose des vésicules synaptiques, aux voies de signalisation dépendantes du calcium (kinases/phosphatases) ainsi qu’aux mécanismes de plasticité synaptique à court et à long terme. Dans des modèles du système nerveux chez la souris, une fonction altérée de CACNA1B a été associée à une dérégulation de l’excitabilité neuronale et de la neurotransmission sensorielle, ce qui appuie sa pertinence pour l’étude des circuits de la douleur, de la susceptibilité aux crises et de phénotypes neuropsychiatriques. Comme CaV2.2 façonne les microdomaines calciques présynaptiques, la perturbation de Cacna1b offre un moyen direct d’interroger la signalisation dépendante de l’activité et la communication au niveau des réseaux.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO N-type Ca++ CP α1B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cacna1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cacna1b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cacna1b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine N-type Ca++ CP α1B.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cacna1b pour l'étude de la signalisation de N-type Ca++ CP α1B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Cacna1b essentiels à la fonction de N-type Ca++ CP α1B
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cacna1b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le N-type Ca++ CP α1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le N-type Ca++ CP α1B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cacna1b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le N-type Ca++ CP α1B plasmide HDR (m) et le N-type Ca++ CP α1B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cacna1b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cacna1b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.