Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401937-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- N-SMase2 Double-Nickase-Plasmid (h) und N-SMase2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SMPD3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: N-SMase2: sc-166637
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401937-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
N-SMase2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401937-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane SMPD3-Gen kodiert die neutrale Sphingomyelinase 2 (N‑SMase2), ein membranassoziiertes Enzym, das Sphingomyelin hydrolysiert und dabei Ceramid und Phosphocholin erzeugt. Durch die Kontrolle der Ceramidproduktion an der Plasmamembran und im Golgi-Apparat reguliert N‑SMase2 den Sphingolipidstoffwechsel, die Organisation von Membran-Mikrodomänen und die Signaltransduktion nachgeschaltet an zelluläre Stress- und Entzündungssignale. Die SMPD3-Aktivität wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Apoptose, Vesikeltransport und die Biogenese extrazellulärer Vesikel beeinflussen, mit nachgelagerten Effekten auf die Lipidhomöostase und die Regulation des Zellzustands. Eine fehlregulierte Ceramid-Signalgebung und eine veränderte SMPD3/N‑SMase2-Funktion sind an krankheitsrelevanten Prozessen beteiligt, darunter Neurobiologie, metabolische Dysfunktion, Entzündung und krebsassoziierte Phänotypen.
N-SMase2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SMPD3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SMPD3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SMPD3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SMPD3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.