Plasmide CRISPR d'Activation (h) Myosin VI: sc-401815-ACT

Le gène humain **MYO6** code la myosine VI, un moteur non conventionnel basé sur l’actine, qui se déplace de manière unique vers l’extrémité moins des filaments d’actine afin de coordonner l’endocytose, le trafic vésiculaire et le remodelage membranaire. La myosine VI participe à l’endocytose médiée par la clathrine, au tri au niveau du Golgi et des endosomes, au trafic lié à l’autophagie et au maintien de la polarité épithéliale, et elle peut influencer la dynamique du cytosquelette qui façonne la migration cellulaire. Grâce à des interactions avec des protéines adaptatrices et des complexes de signalisation, **MYO6** contribue à des voies qui régissent le transport intracellulaire et l’organisation de l’actine dans de nombreux types cellulaires. Une expression ou une fonction altérée de **MYO6** a été associée à des phénotypes impliquant l’homéostasie sensorielle et épithéliale, et a été étudiée dans des contextes de biologie tumorale où les programmes de trafic et de motilité sont dérégulés.

Myosin VI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYO6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Myosin VI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYO6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYO6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Myosin VI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYO6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Myosin VI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Myosin VI dans les cellules tumorales présentant une expression de MYO6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.