myogenin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400176

Übersicht

MYOG kodiert Myogenin, einen Transkriptionsfaktor der basischen Helix-Loop-Helix-Familie, der die terminale Differenzierung der Skelettmuskulatur vorantreibt, indem er den Austritt von Myoblasten aus dem Zellzyklus mit der Aktivierung muskelstruktureller Genprogramme koordiniert. Myogenin wirkt innerhalb des zentralen Netzwerks myogener Regulationsfaktoren zusammen mit MYOD1 und MYF5 und integriert entwicklungsbiologische Signale aus Signalwegen wie WNT, NOTCH und TGF-β/SMAD, um Festlegung der Zelllinie und Reifung zu steuern. Es bindet an E-Box-Motive und reguliert dadurch Transkriptionsprogramme, die mit Myofibrillogenese, metabolischem Remodeling und neuromuskulärer Entwicklung verknüpft sind. Eine fehlregulierte MYOG-Expression und myogene Transkriptionsschaltkreise werden in Studien zu Muskelabbau, beeinträchtigter Regeneration und Mechanismen neuromuskulärer Erkrankungen als molekulare Ausleseparameter verwendet.

Das myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MYOG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MYOG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MYOG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die myogenin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MYOG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der myogenin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MYOG-Exone abzielen, die für die myogenin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MYOG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom myogenin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MYOG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das myogenin HDR-Plasmid (h) und myogenin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MYOG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MYOG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.