myocilin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401843-ACT

Das humane Gen **MYOC** kodiert **Myocilin**, ein sezerniertes extrazelluläres Glykoprotein, das in okulären Geweben angereichert ist und zur Organisation der extrazellulären Matrix, zur Zelladhäsion sowie zur Modulation der Zytoskelettdynamik beiträgt. Myocilin ist mit Qualitätskontrollprozessen im endoplasmatischen Retikulum assoziiert und kann bei Fehlfaltung die Proteostase und Stress-Signalwege beeinflussen, was Sekretion und Matrix-Remodellierung beeinträchtigt. Eine veränderte MYOC-Expression oder Proteinverarbeitung wurde mit einer dysregulierten Kammerwasserabflussrate und einer Funktionsstörung des Trabekelwerks in Verbindung gebracht, wodurch MYOC für Studien zur Homöostase des intraokularen Drucks relevant ist. Diese Funktionen positionieren MYOC an der Schnittstelle von extrazellulären Matrixwegen, vesikulärem Transport und zellulären Stressantworten, die zur Untersuchung der okulären Zellbiologie genutzt werden.

myocilin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYOC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

myocilin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYOC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYOC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen myocilin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYOC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von myocilin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des myocilin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYOC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.