MYL2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402798-ACT

MYL2 kodiert die ventrikuläre/kardiale regulatorische Myosin-Leichtkette 2, eine Ca2+-responsive Komponente des Myosin‑II‑Komplexes, die das Zyklieren der Aktin–Myosin‑Querbrücken und die Erzeugung kontraktiler Kraft in quergestreifter Muskulatur moduliert. Über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle der Myosin-Motoraktivität trägt MYL2 zur Organisation des Sarkomers, zur Mechanik von Kardiomyozyten und zu Erregungs‑Kontraktions‑Kopplungswegen bei, die das Herzzeitvolumen koordinieren. Eine veränderte MYL2-Expression oder -Funktion wird mit erblichen und erworbenen Kardiomyopathien in Verbindung gebracht, bei denen eine gestörte sarkomerische Regulation die Struktur und Leistungsfähigkeit des Myokards beeinträchtigen kann. Als Marker und Regulator der Differenzierung und Kontraktilität des Herzmuskels wird MYL2 häufig in Studien zur Herzentwicklung, Krankheitsmodellierung und Mechanobiologie eingesetzt.

MYL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYL2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYL2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYL2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYL2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYL2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYL2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYL2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYL2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYL2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.