MYL10 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-413972-ACT

MYL10 kodiert die Myosin-Leichtkette 10, eine regulatorische Komponente des Aktomyosin-Zytoskeletts, die die Aktivität des Myosinmotors moduliert und zur Kraftentwicklung beiträgt. Über eine phosphorylierungsabhängige Kontrolle der Myosin‑II‑Funktion ist MYL10 an Prozessen des zytoskelettalen Umbaus beteiligt, die Zellform, Kontraktilität, Adhäsion und Motilität beeinflussen. Diese Mechanismen greifen in Signalwege ein, die die Aktindynamik sowie die Rho/ROCK‑abhängige kontraktile Signalübertragung steuern, wodurch MYL10 für Studien zur Gewebeorganisation und zu mechanisch regulierten zellulären Verhaltensweisen relevant ist. Eine veränderte Regulation der zytoskelettalen Kontraktilität ist häufig mit aberranter Migration und invasiven Phänotypen assoziiert, was die Untersuchung von MYL10 in krankheitsrelevanten Modellen unterstützt, in denen die Aktomyosinspannung fehlreguliert ist.

MYL10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYL10-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYL10 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYL10-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYL10-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYL10-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYL10-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYL10-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYL10-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYL10-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.