Muskelin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-409182-ACT

Das humane MKLN1 kodiert Muskelin, ein multidomäniges Scaffold-Protein, das an der Organisation der zytoskelettalen Architektur und der Koordination des intrazellulären Transports beteiligt ist. Muskelin wird mit aktinabhängigen Prozessen, Vesikeltransport und dem regulierten Abbau von Proteinkomplexen in Verbindung gebracht und unterstützt so die räumliche Kontrolle von Signalübertragung sowie Rezeptordynamik. Über diese Funktionen kann MKLN1 Signalwege beeinflussen, die Zelladhäsion, Migration und Proteostase steuern – Prozesse, die in der Krebsbiologie und in neurobiologischen Kontexten häufig umgebaut werden. Eine fehlregulierte Expression oder Störungen muskelinassoziierter Netzwerke wurden in krankheitsrelevanten Modellen im Hinblick auf Auswirkungen auf Zellmorphologie, Stressantworten und die Homöostase der Signalübertragung untersucht.

Muskelin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MKLN1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Muskelin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MKLN1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MKLN1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Muskelin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MKLN1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Muskelin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Muskelin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MKLN1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.