Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431204
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Mucin 4/MUC4 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Mucin 4/MUC4-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Mucin 4/MUC4: sc-33654
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-431204 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Muc4 kodiert Muzin 4 (MUC4), ein hochmolekulares, stark O-glykosyliertes transmembranäres Muzin, das zum Schutz, zur Hydratation und zur Schmierung epithelialer Oberflächen beiträgt. Über seine ausgedehnte extrazelluläre Domäne und die Lokalisation an der Zelloberfläche beeinflusst MUC4 Zell‑Zell‑ und Zell‑Matrix‑Interaktionen, moduliert Barriereeigenschaften und kann rezeptornahe Signalübertragung sowie nachgeschaltete Signalwege beeinflussen, die mit Proliferation, Adhäsion und Migration verknüpft sind. In Mausgeweben ist die Muc4-Expression mit mukosalen Epithelien und sekretorischen Programmen assoziiert und integriert sich in Glykosylierungs‑ und Membrantransportprozesse, die die Glycokalyx prägen. Fehlregulierte Muzinexpression und veränderte Glykosylierung werden häufig im Kontext von Entzündung, epithelialem Remodeling und tumorassoziierten Veränderungen von Adhäsion und Signalgebung untersucht.
Das Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Muc4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Muc4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Muc4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mucin 4/MUC4-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Muc4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mucin 4/MUC4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Muc4-Exone abzielen, die für die Mucin 4/MUC4-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Muc4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Mucin 4/MUC4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Muc4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mucin 4/MUC4 HDR-Plasmid (m) und Mucin 4/MUC4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Muc4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Muc4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.