Plasmide CRISPR d'Activation (h) MTF-1: sc-402846-ACT

MTF1 code le facteur de transcription 1 régulateur des métaux (MTF-1), une protéine à doigts de zinc se liant à l’ADN, qui orchestre des programmes transcriptionnels contrôlant l’homéostasie des métaux cellulaires et l’adaptation au stress. En réponse aux fluctuations de Zn2+ intracellulaire et à l’exposition à un stress oxydant ou électrophile, MTF-1 régule des gènes sensibles aux métaux impliqués dans la détoxification et la cytoprotection, en intégrant des signaux relevant du contrôle redox, de la protéostase et des voies de stress inflammatoire. Ce circuit transcriptionnel recoupe des processus liés à la dysrégulation de l’homéostasie des métaux et aux dommages oxydatifs, fréquemment étudiés dans la neurodégénérescence, les dysfonctionnements métaboliques et la cancérogenèse. En tant que médiateur central de la régulation génique dépendante du stress, MTF-1 constitue un nœud accessible pour analyser comment la détection des métaux remodèle les réseaux transcriptionnels et les décisions de destinée cellulaire.

MTF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MTF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MTF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MTF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MTF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MTF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MTF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MTF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MTF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MTF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.