MSH2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-400966-LAC

MSH2 kodiert einen zentralen Faktor der DNA-Mismatch-Reparatur (MMR), der mit MSH6 (MutSα) oder MSH3 (MutSβ) Heterodimere bildet, um Basenfehlpaarungen sowie während der Replikation entstehende Insertions-/Deletionsschleifen zu erkennen. Nach der Erkennung der Läsion koordinieren MSH2-haltige Komplexe die nachgeschalteten Reparaturschritte zusammen mit MLH1/PMS2 und replikationsassoziierten Faktoren, um die Genomstabilität zu erhalten und die Mutagenese zu begrenzen. Eine Störung der MSH2-abhängigen MMR fördert Mikrosatelliteninstabilität und eine erhöhte Mutationslast, was eine Verbindung zwischen MSH2-Dysfunktion und der Biologie hereditärer sowie sporadischer Tumoren herstellt. MSH2 ist außerdem an zellulären Reaktionen auf bestimmte DNA-schädigende Agenzien und Replikationsstress beteiligt und ist damit ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung des Crosstalks zwischen DNA-Reparaturwegen.

MSH2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MSH2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MSH2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MSH2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MSH2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MSH2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.