MRP6 Plasmide Double Nickase (h): sc-402219-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRP6 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MRP6 Double Nickase Plasmid (h) e il MRP6 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ABCC6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRP6 Antibody (M6II-31): sc-59618
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRP6 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402219-NIC | 20 µg | $410.00 |
ABCC6 codifica il trasportatore umano della famiglia ATP-binding cassette MRP6, una pompa di efflusso di membrana principalmente associata alla regolazione dell’omeostasi dei nucleotidi extracellulari e del pirofosfato. Influenzando il rilascio di ATP e la sua successiva conversione in pirofosfato inorganico, MRP6 contribuisce a modulare le vie di mineralizzazione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Un’attività alterata di ABCC6 è fortemente associata a fenotipi di calcificazione ectopica e a patologie del tessuto connettivo, tra cui lo pseudoxantoma elastico, ed è stata studiata in ambiti di biologia vascolare e dermica. Queste funzioni collegano ABCC6 a una più ampia segnalazione purinergica, al metabolismo minerale e al controllo dei microambienti tissutali mediato dai trasportatori.
MRP6 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ABCC6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ABCC6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ABCC6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ABCC6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.