MRP-S18B CRISPR Activation Plasmid (h): sc-412012-ACT

MRPS18B kodiert das humane mitochondriale ribosomale Protein MRP-S18B, eine Komponente der kleinen 28S-Untereinheit, die die Translation der mitochondrial kodierten Proteine der oxidativen Phosphorylierung unterstützt. Durch seinen Beitrag zur mitochondrialen Proteinsynthese trägt MRP-S18B dazu bei, die Integrität der Elektronentransportkette, die ATP-Produktion und die allgemeine mitochondriale Homöostase aufrechtzuerhalten. Störungen der Mitroribosomenfunktion können den zellulären Energiestoffwechsel umgestalten und oxidativen Stress erhöhen, wodurch die MRPS18B-assoziierte Biologie mit Signalwegen der mitochondrialen Qualitätskontrolle, Proteostase und Stresssignalübertragung verknüpft wird. Eine veränderte mitochondriale Translationskapazität wird häufig im Kontext von Neurodegeneration, kardiometabolischen Dysfunktionen und der krebsassoziierten metabolischen Umprogrammierung beobachtet, was MRPS18B zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien macht.

MRP-S18B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MRPS18B-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MRP-S18B Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MRPS18B-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MRPS18B-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MRP-S18B-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MRPS18B-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MRP-S18B-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MRP-S18B-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MRPS18B-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.