Mrf-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-431969-ACT

Arid5a (também conhecida como Mrf-1) codifica uma proteína reguladora ligante de RNA que modula o controle pós-transcricional da expressão de genes inflamatórios. Em células de camundongo, Arid5a estabiliza transcritos selecionados de citocinas e de resposta imune e contrabalança vias de degradação de mRNA, moldando as saídas de sinalização a jusante da ativação imune inata e de respostas ao estresse. Esse eixo regulatório se cruza com programas mais amplos de transcrição e de metabolismo de RNA que influenciam estados de diferenciação e a dinâmica de ativação celular. A atividade desregulada de Arid5a tem sido implicada na patobiologia inflamatória e em lesão tecidual mediada pelo sistema imune, tornando-a um alvo útil para estudos mecanísticos de redes de citocinas e de sinalização inflamatória.

Mrf-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Arid5a sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Mrf-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Arid5a em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Arid5a, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Mrf-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Arid5a nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Mrf-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Mrf-1 em células tumorais com expressão de Arid5a silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.