Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKγ (h): sc-406697
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MRCKγ Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MRCKγ, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MRCKγ Antibody (2C3): sc-517148
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKγ (h) | sc-406697 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
CDC42BPG code la kinase gamma liant Cdc42, apparentée à la kinase de la dystrophie myotonique (MRCKγ), une kinase sérine/thréonine qui agit en aval de la GTPase Rho CDC42 pour coordonner la contractilité actine–myosine. MRCKγ phosphoryle des régulateurs du cytosquelette, tels que la chaîne légère de la myosine, ainsi que des substrats apparentés, afin de moduler la tension corticale, la polarité cellulaire et la migration directionnelle. Par ces activités, elle contribue à des réseaux de signalisation dépendants de Rho/CDC42 qui façonnent la dynamique d’adhérence, la morphogenèse et le comportement invasif. La dérégulation de la signalisation de la famille MRCK a été associée à un remodelage cytosquelettique altéré dans des contextes pertinents pour la motilité des cellules tumorales et la dissémination métastatique, ainsi qu’à des troubles plus larges de l’architecture cellulaire.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKγ (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CDC42BPG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CDC42BPG, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CDC42BPG à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MRCKγ.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CDC42BPG pour l'étude de la signalisation de MRCKγ, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CDC42BPG essentiels à la fonction de MRCKγ
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CDC42BPG pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MRCKγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MRCKγ plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CDC42BPG. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MRCKγ plasmide HDR (h) et le MRCKγ (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CDC42BPG pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CDC42BPG définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.