MRCKγ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406697
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MRCKγ Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico MRCKγ, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MRCKγ Antibody (2C3): sc-517148
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MRCKγ Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-406697 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
CDC42BPG codifica la chinasi gamma legante Cdc42 correlata alla chinasi della distrofia miotonica (MRCKγ), una chinasi serina/treonina che agisce a valle della GTPasi Rho CDC42 per coordinare la contrattilità actina–miosina. MRCKγ fosforila regolatori del citoscheletro quali la catena leggera della miosina e substrati correlati, modulando la tensione corticale, la polarità cellulare e la migrazione direzionale. Attraverso queste attività contribuisce a reti di segnalazione dipendenti da Rho/CDC42 che modellano la dinamica delle adesioni, la morfogenesi e il comportamento invasivo. La deregolazione della segnalazione della famiglia MRCK è stata collegata ad alterazioni del rimodellamento del citoscheletro in contesti rilevanti per la motilità delle cellule tumorali e la disseminazione metastatica, nonché a disturbi più ampi dell’architettura cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MRCKγ (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CDC42BPG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CDC42BPG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CDC42BPG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MRCKγ.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CDC42BPG per lo studio della segnalazione di MRCKγ, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni CDC42BPG critici per la funzione di MRCKγ
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CDC42BPG per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal MRCKγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MRCKγ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CDC42BPG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal MRCKγ Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MRCKγ (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CDC42BPG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CDC42BPG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.