MOR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401224

Übersicht

OPRM1 kodiert den humanen μ‑Opioidrezeptor MOR‑1, einen Gi/Go‑gekoppelten GPCR, der endogene Opioidpeptide und exogene Opioidliganden bindet, um neuronale Erregbarkeit und die Freisetzung von Neurotransmittern zu regulieren. Die MOR‑1‑Signalübertragung hemmt die Adenylylcyclase, moduliert cAMP/PKA‑Signalwege, aktiviert MAPK/ERK‑Kaskaden und beeinflusst die Aktivität von Ionenkanälen; dadurch prägt sie die synaptische Transmission in Schaltkreisen für Schmerz, Belohnung und Stress. Die Rezeptoraktivierung führt zur Rekrutierung von β‑Arrestin, zur Desensibilisierung und zum Trafficking, wodurch MOR‑1 mit Rezeptorinternalisierung und adaptiven Signalantworten verknüpft ist. Veränderte OPRM1‑Funktion oder ‑Regulation wurde mit interindividuellen Unterschieden in der analgetischen Wirkung, mit Substanzkonsum‑Phänotypen und mit neuropsychiatrischen Merkmalen in Verbindung gebracht und ist daher für mechanistische Studien in Neurobiologie und Pharmakologie relevant.

Das MOR-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des OPRM1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des OPRM1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von OPRM1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MOR-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von OPRM1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MOR-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf OPRM1-Exone abzielen, die für die MOR-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere OPRM1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MOR-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MOR-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des OPRM1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MOR-1 HDR-Plasmid (h) und MOR-1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von OPRM1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten OPRM1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.