Plásmido Doble Nickase (h) MKP-2: sc-401479-NIC

La fosfatasa de proteínas de doble especificidad 4 (DUSP4), también conocida como fosfatasa de MAP quinasas 2 (MKP-2), es una fosfatasa nuclear que desfosforila e inactiva las MAPK, con una fuerte actividad hacia ERK1/2 y una regulación dependiente del contexto de la señalización de JNK y p38. Al modular la dinámica de fosforilación de las MAPK, MKP-2 contribuye al control de programas de genes de respuesta inmediata, la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la transcripción sensible al estrés. DUSP4 participa en la regulación por retroalimentación aguas abajo de receptores tirosina cinasa y de señales inflamatorias, modelando la amplitud y la duración de la salida de la vía MAPK. La expresión o actividad alteradas de DUSP4 se han asociado con la señalización MAPK desregulada observada en múltiples contextos patológicos, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para el mapeo de vías y fenotipos en células humanas.

MKP-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus DUSP4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de DUSP4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de DUSP4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con DUSP4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.