MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m): sc-422507-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MKP-1/DUSP1 Double-Nickase-Plasmid (m) und MKP-1/DUSP1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Dusp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MKP-1/DUSP1: sc-373841
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-422507-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MKP-1/DUSP1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-422507-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Dusp1 kodiert die Mitogen-aktivierte Proteinkinase-Phosphatase 1 (MKP-1/DUSP1), eine dualspezifische Phosphatase, die MAPKs einschließlich ERK, JNK und p38 dephosphoryliert und inaktiviert. Als induzierbarer Immediate-Early-Regulator vermittelt MKP-1 eine negative Rückkopplungskontrolle stress- und zytokingetriebener Signalwege und formt dadurch Transkriptionsprogramme, die mit Entzündung, Apoptose und Zellzyklusprogression verknüpft sind. In Mauszellen wird Dusp1 häufig in Signalwegen untersucht, die nachgeschaltet an TLR-Liganden, Wachstumsfaktoren und oxidativen Stress liegen, wo es Amplitude und Dauer der MAPK-Aktivierung begrenzt. Eine Fehlregulation der DUSP1-Aktivität wurde mit entzündlichen Phänotypen und veränderten Stressantworten in Verbindung gebracht, was für Modelle der Immundysregulation, metabolischer Erkrankungen und der Krebsbiologie relevant ist.
MKP-1/DUSP1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Dusp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Dusp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Dusp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Dusp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.