Plasmide CRISPR d'Activation (h) Mitofilin: sc-403617-ACT

Le gène humain **IMMT** code la mitofiline, une protéine d’échafaudage essentielle de la membrane interne mitochondriale et un composant central du complexe **MICOS** (système d’organisation des sites de contact mitochondriaux et des crêtes). La mitofiline coordonne la formation des jonctions de crête, stabilise l’organisation de la chaîne respiratoire et favorise l’import des protéines mitochondriales ainsi que le trafic lipidique au niveau des sites de contact intermembranaires, reliant l’architecture mitochondriale à la phosphorylation oxydative et à l’homéostasie métabolique. La perturbation de la structure des crêtes dépendante d’IMMT est associée à une dynamique mitochondriale altérée, à une bioénergétique compromise et à une susceptibilité accrue aux réponses cellulaires au stress. IMMT a été étudié dans le contexte de troubles caractérisés par une dysfonction mitochondriale, notamment dans la biologie des maladies neurodégénératives et cardiométaboliques, où le remodelage des crêtes peut influencer la signalisation et les voies de survie cellulaire.

Mitofilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IMMT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mitofilin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IMMT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IMMT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mitofilin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IMMT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mitofilin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mitofilin dans les cellules tumorales présentant une expression de IMMT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.