mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426664

Übersicht

Ftmt kodiert mitochondriales Ferritin, ein Eisenspeicherprotein, das in der mitochondrialen Matrix lokalisiert ist und dazu beiträgt, labiles Eisen zu puffern und eisenabhängige oxidative Schäden zu begrenzen. Durch die Sequestrierung von zweiwertigem Eisen und die Beeinflussung des Hämsowie des Eisen-Schwefel-Cluster-Stoffwechsels trägt Ftmt zur mitochondrialen Redox-Homöostase, zur Atmungsfunktion und zu zellulären Antworten auf oxidativen Stress bei. Eine veränderte mitochondriale Eisenhandhabung ist an Signalwegen beteiligt, die mit Ferroptose, Neurodegeneration, Myopathie und anderen Erkrankungen in Zusammenhang stehen, die durch mitochondriale Dysfunktion und ein Ungleichgewicht reaktiver Sauerstoffspezies gekennzeichnet sind. In Mausmodellen wird Ftmt genutzt, um gewebespezifischen Eisentransport, mitochondriale Qualitätskontrolle und Stressanpassung in metabolischen und neuronalen Systemen zu untersuchen.

Das mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ftmt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ftmt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ftmt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die mitochondrial ferritin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ftmt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der mitochondrial ferritin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ftmt-Exone abzielen, die für die mitochondrial ferritin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ftmt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom mitochondrial ferritin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ftmt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das mitochondrial ferritin HDR-Plasmid (m) und mitochondrial ferritin HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ftmt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ftmt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.