Plasmide CRISPR d'Activation (h) mitochondrial ferritin: sc-401694-ACT

FTMT code la ferritine mitochondriale, une protéine de stockage du fer intramitochondriale qui séquestre le fer ferreux et limite la formation d’espèces réactives de l’oxygène catalysée par le fer. En tamponnant le pool de fer labile au sein de la matrice mitochondriale, FTMT influence l’homéostasie du fer, le métabolisme de l’hème et des centres fer‑soufre, ainsi que l’équilibre rédox mitochondrial plus global. Une expression altérée de FTMT a été associée à la vulnérabilité cellulaire en situation de stress oxydant et fait l’objet d’études dans des contextes de neurodégénérescence, de dérégulation du fer liée à l’anémie et de dysfonctionnement mitochondrial. En tant que gardien du fer mitochondrial, FTMT est fréquemment étudiée pour son impact sur la respiration, le remodelage métabolique et la signalisation des réponses au stress.

mitochondrial ferritin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de FTMT sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

mitochondrial ferritin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus FTMT dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription FTMT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de mitochondrial ferritin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus FTMT natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de mitochondrial ferritin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie mitochondrial ferritin dans les cellules tumorales présentant une expression de FTMT silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.