mGluR-5 Double Nickase Plasmid (h): sc-401460-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das mGluR-5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- mGluR-5 Double-Nickase-Plasmid (h) und mGluR-5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRM5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: mGluR-5: sc-293442
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
mGluR-5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401460-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
mGluR-5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401460-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRM5 kodiert den menschlichen metabotropen Glutamatrezeptor 5 (mGluR-5), einen GPCR der Klasse C, der hauptsächlich an Gq/11 koppelt, um die Phospholipase Cβ zu aktivieren, IP3/DAG-Signalwege anzustoßen, das intrazelluläre Ca2+ zu erhöhen und PKC- sowie MAPK/ERK-abhängige Transkriptionsprogramme zu aktivieren. mGluR-5 ist an exzitatorischen Synapsen angereichert, wo er die synaptische Plastizität, die neuronale Erregbarkeit und den Rezeptortransport moduliert, einschließlich funktioneller Wechselwirkungen mit der NMDA-Rezeptor-Signalübertragung. Über diese Signalwege trägt GRM5 zur Entwicklung neuronaler Schaltkreise und zur aktivitätsabhängigen Genregulation bei und wird häufig im Kontext neuroentwicklungsbedingter und neuropsychiatrischer Phänotypen sowie der Anfallsanfälligkeit und neurodegenerativer Mechanismen untersucht. Die experimentelle Modulation von GRM5 wird genutzt, um glutamaterge Signalnetzwerke und nachgeschaltete calciumabhängige Prozesse in humanen zellbasierten Modellen zu analysieren.
mGluR-5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRM5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRM5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRM5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRM5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.