MGAT1 Double Nickase Plasmid (m): sc-427040-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MGAT1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MGAT1 Double-Nickase-Plasmid (m) und MGAT1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Mogat1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MGAT1: sc-376079
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MGAT1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-427040-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MGAT1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-427040-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Mogat1** kodiert **MGAT1** (Monoacylglycerol-O-Acyltransferase 1), ein mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziiertes Enzym, das die acyl-CoA‑abhängige Umwandlung von Monoacylglycerol zu Diacylglycerol katalysiert und damit Substrat für die Triacylglycerol-Synthese bereitstellt. Durch die Regulation der Diacylglycerol-Verfügbarkeit verknüpft MGAT1 Programme der Lipidspeicherung mit Signalprozessen, die durch DAG beeinflusst werden, und greift in Signalwege ein, die die Membranlipidzusammensetzung und metabolische Stressantworten mitgestalten. Die Mogat1-Expression ist in metabolisch aktiven Geweben ausgeprägt und wird häufig im Kontext von Nährstoffüberschuss, hepatischer Lipidakkumulation und veränderter Insulinsensitivität untersucht, wobei Verschiebungen in der Neutral-Lipid-Synthese die zelluläre Homöostase umgestalten können. Diese Eigenschaften machen MGAT1 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zu Lipidstoffwechsel, Energiebilanz und nachgeschalteten transkriptionellen Anpassungen in Mausmodellen.
MGAT1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Mogat1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Mogat1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Mogat1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Mogat1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.