Plasmide CRISPR/Cas9 KO MFG-E8 (m): sc-421639
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- MFG-E8 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique MFG-E8, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: MFG-E8 Antibody (H-3): sc-377356
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO MFG-E8 (m) | sc-421639 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Mfge8 code la lactadhérine (MFG-E8), une glycoprotéine sécrétée qui fait le lien entre la phosphatidylsérine des cellules apoptotiques et des intégrines telles que ITGAV/ITGB3 et ITGAV/ITGB5 présentes à la surface des phagocytes, favorisant l’efférocytose et limitant la nécrose secondaire. Par cette activité de type opsonisation, MFG-E8 influence l’homéostasie immunitaire, la résolution de l’inflammation et le remodelage tissulaire, avec des effets en aval sur la signalisation des cytokines et les états d’activation des macrophages. Dans les modèles murins, une altération de la fonction de Mfge8 a été associée à une élimination dysrégulée des cellules mourantes, à des phénotypes inflammatoires chroniques et à des réponses de réparation déficientes dans des contextes vasculaires, métaboliques et neuro-inflammatoires.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MFG-E8 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Mfge8 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Mfge8, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Mfge8 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MFG-E8.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Mfge8 pour l'étude de la signalisation de MFG-E8, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Mfge8 essentiels à la fonction de MFG-E8
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Mfge8 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le MFG-E8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le MFG-E8 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Mfge8. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le MFG-E8 plasmide HDR (m) et le MFG-E8 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Mfge8 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Mfge8 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.