MELK Lentiviral Activation Particles (h): sc-403062-LAC

Die maternale embryonale Leucin-Zipper-Kinase (MELK) ist eine Serin/Threonin-Kinase, die an der Regulation des Fortschreitens des Zellzyklus, mitotischer Kontrollpunkte und progenitorähnlicher Zellzustände beteiligt ist. Die MELK-Signalgebung ist mit Signalwegen verknüpft, die Proliferation und Stressanpassung steuern, und wurde mit der Kontrolle von Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht, die Zellwachstum und Überleben unterstützen. Eine dysregulierte MELK-Expression wird bei zahlreichen Tumortypen häufig beobachtet und ist mit aggressiven Phänotypen assoziiert, was MELK zu einem häufigen Ziel bei der Untersuchung onkogener Signalnetzwerke macht. In humanen Zellmodellen wird MELK eingesetzt, um die kinaseabhängige Kontrolle von Teilung, Differenzierung und zellulärer Fitness unter replikativem oder genotoxischem Stress zu untersuchen.

MELK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente MELK-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

MELK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der MELK-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen MELK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen MELK-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.