Particules Lentivirales d'Activation (h) Mel-CAM: sc-401020-LAC

MCAM code pour Mel-CAM (CD146), une molécule d’adhésion de la superfamille des immunoglobulines exprimée à la surface cellulaire, qui régule les interactions cellule–cellule et cellule–matrice, l’organisation des jonctions endothéliales et le remodelage du cytosquelette. Mel-CAM participe à des processus liés à la biologie vasculaire, notamment l’angiogenèse, la transmigration des leucocytes et la fonction de barrière, et a été associée à des programmes de signalisation qui convergent vers la dynamique des adhésions focales et la motilité médiée par les GTPases de la famille Rho. Une expression dérégulée de MCAM est fréquemment étudiée dans le contexte de la progression tumorale et des métastases, de la biologie du mélanome et de l’inflammation vasculaire, où des altérations de l’adhésion et de la migration contribuent aux phénotypes pathologiques. De plus, MCAM est utilisé comme marqueur pour caractériser les états des cellules endothéliales et périvasculaires et pour profiler l’hétérogénéité au sein des microenvironnements stromaux et immunitaires.

Les particules d'activation lentivirales Mel-CAM (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MCAM dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Mel-CAM (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MCAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Mel-CAM. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MCAM ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.