Plásmido CRISPR de Activación (m) Mel-CAM: sc-429966-ACT

El gen **Mcam** de ratón codifica **Mel-CAM (CD146/MCAM)**, un receptor de adhesión de la superfamilia de las inmunoglobulinas enriquecido en la superficie celular, donde modula las interacciones célula–célula y célula–matriz. Mel-CAM participa en la biología endotelial y perivascular, influyendo en la remodelación del citoesqueleto, la migración y procesos asociados a la barrera mediante nodos de señalización que convergen con la dinámica de las adhesiones focales y las vías de las GTPasas de la familia Rho. En contextos inmunitarios y estromales, la expresión de MCAM puede modelar el tráfico de leucocitos y la remodelación tisular, y su expresión desregulada se ha vinculado a la angiogénesis patológica, la remodelación asociada a fibrosis y fenotipos de progresión tumoral. Estas propiedades hacen de **Mcam** una diana útil para analizar la señalización dependiente de la adhesión, la regulación del nicho vascular y las contribuciones del microambiente a estados celulares relevantes para la enfermedad en modelos murinos.

Mel-CAM El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Mcam sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Mel-CAM El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Mcam en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Mcam, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Mel-CAM. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Mcam y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Mel-CAM en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Mel-CAM en células tumorales con expresión de Mcam silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.