MEK-5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401688-ACT

MAP2K5 kodiert die mitogenaktivierte Proteinkinase-Kinase 5 (MEK-5), eine dualspezifische Kinase, die als zentraler upstream-Aktivator von ERK5 (MAPK7) in der MEK5–ERK5-Signalachse fungiert. Dieser Signalweg integriert Wachstumsfaktor- und Stresssignale, um Transkriptionsprogramme zu steuern, die Proliferation, Differenzierung, Überleben und Zytoskelett-Dynamik kontrollieren; zudem sind Rollen in der Gefäßbiologie und der Zellmigration beschrieben. Die MEK-5–ERK5-Signalübertragung überschneidet sich mit der MAPK-abhängigen Kontrolle der Expression von Immediate-Early-Genen und kann Antworten auf oxidative und entzündliche Stimuli beeinflussen. Eine Fehlregulation der MAP2K5/ERK5-Aktivität wurde mit veränderten onkogenen Signalkontexten, kardiovaskulär assoziierten Phänotypen und weiteren Zuständen in Verbindung gebracht, bei denen ein „Rewiring“ des MAPK-Netzwerks zu krankheitsrelevanten zellulären Zuständen beiträgt.

MEK-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAP2K5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MEK-5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAP2K5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAP2K5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MEK-5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAP2K5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MEK-5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MEK-5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAP2K5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.