megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401094-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- megalin/LRP2 Double-Nickase-Plasmid (h) und megalin/LRP2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LRP2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: megalin/LRP2: sc-515772
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401094-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
megalin/LRP2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401094-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LRP2 kodiert Megalin, einen großen endozytotischen Rezeptor aus der LDL-Rezeptorfamilie, der in polarisierten Epithelzellen stark exprimiert wird und die clathrinabhängige Aufnahme verschiedenster Liganden vermittelt, darunter Vitaminträger, Lipoproteine, Hormone und Signalproteinkomplexe. Megalin arbeitet mit Adapterproteinen und Korezeptoren zusammen, um die rezeptorvermittelte Endozytose, den lysosomalen Transport, die Nährstoffverarbeitung in Epithelien und die zelluläre Homöostase im proximalen Nierentubulus sowie in anderen resorptiven Geweben zu regulieren. Über Interaktionen mit Signalwegen wie dem Retinoid- und Vitamin-D-Transport, der Handhabung von Sonic-Hedgehog-assoziierten Morphogenen und der Regulation der Clearance extrazellulärer Proteine beeinflusst LRP2 Entwicklungs- und Stoffwechselprozesse. Genetische Inaktivierung oder Fehlregulation von LRP2 wurde mit syndromalen Entwicklungsanomalien und Phänotypen einer renalen Tubulusfunktionsstörung in Verbindung gebracht, was seine Bedeutung für mechanistische Studien der Epithelbiologie und endozytotischer Signalprozesse unterstreicht.
megalin/LRP2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LRP2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LRP2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LRP2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LRP2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.