Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Med8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404402
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Med8 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Med8, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Med8 Anticuerpo (A-5): sc-365960
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Med8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404402 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
MED8 codifica Med8, una subunidad conservada del complejo Mediator que sirve de puente entre factores de transcripción específicos de secuencia y la ARN polimerasa II para coordinar el inicio y la elongación de la transcripción. A través de su papel en la integridad del Mediator y en la comunicación promotor–potenciador, MED8 contribuye a la regulación de la progresión del ciclo celular, los programas de diferenciación y la expresión génica en respuesta al estrés. La alteración de componentes del Mediator puede reconfigurar redes transcripcionales que influyen en la estabilidad genómica y el estado metabólico, lo que hace que MED8 sea relevante para estudios mecanísticos en biología del cáncer y otros trastornos impulsados por la desregulación transcripcional. Por lo tanto, MED8 humano constituye un nodo útil para investigar vías centrales de control transcripcional y dependencias de regulación génica dependientes del contexto.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Med8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MED8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MED8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MED8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Med8.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MED8 para la investigación de la señalización de Med8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de MED8 críticos para la función de Med8
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MED8 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Med8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Med8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MED8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Med8 (h) y el plásmido HDR Med8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MED8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MED8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.