MDR1/ABCB1 Double Nickase Plasmid (h): sc-400178-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MDR1/ABCB1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MDR1/ABCB1 Double-Nickase-Plasmid (h) und MDR1/ABCB1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ABCB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: MDR1/ABCB1: sc-55510
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MDR1/ABCB1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400178-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MDR1/ABCB1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400178-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ABCB1 (MDR1/P-Glykoprotein) kodiert einen ATP-bindenden Kassettentransporter (ABC)-Effluxtransporter, der überwiegend in der Plasmamembran lokalisiert ist und durch ATP-Hydrolyse ein breites Spektrum an Xenobiotika und endogenen Metaboliten aus der Zelle exportiert. MDR1/ABCB1 trägt zu epithelialen Barriere- und gewebeschützenden Funktionen in Organen wie Darm, Leber, Niere und an der Blut-Hirn-Schranke bei und beeinflusst dadurch die intrazelluläre Verteilung von Arzneistoffen sowie zelluläre Stressantworten. Seine Aktivität ist mit Entgiftungs- und pharmakokinetischen Signalwegen verknüpft, einschließlich einer koordinierten Regulation durch nukleäre Rezeptorsignale (z. B. PXR, CAR) und durch Membrantransportprozesse, die die Transporterhäufigkeit an der Zelloberfläche steuern. Eine Fehlregulation der ABCB1-Expression oder -Funktion wird häufig im Zusammenhang mit Multidrug-Resistance-Phänotypen in Krebsmodellen sowie mit der Variabilität von Arzneistoffantworten zwischen Geweben untersucht.
MDR1/ABCB1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ABCB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ABCB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ABCB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ABCB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.