Plásmido Doble Nickase (h) MDH2: sc-402825-NIC

MDH2 codifica la malato deshidrogenasa mitocondrial, una enzima dependiente de NAD que cataliza la conversión reversible de malato en oxaloacetato, lo que sustenta el ciclo del ácido tricarboxílico (TCA) y la homeostasis redox mitocondrial. A través de su función en el metabolismo oxidativo, MDH2 contribuye a la producción de ATP, al equilibrio NADH/NAD⁺ y al flujo anaplerótico que conecta la función mitocondrial con el metabolismo global del carbono. La alteración de la actividad de MDH2 puede modificar la capacidad respiratoria y la señalización metabólica, procesos que se investigan con frecuencia en estudios sobre metabolismo tumoral, trastornos mitocondriales y neurodegeneración. Como enzima central de la matriz mitocondrial, MDH2 también es relevante para estudiar la adaptación metabólica a la hipoxia, el estrés por nutrientes y la dinámica de las especies reactivas de oxígeno.

MDH2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MDH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MDH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MDH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MDH2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.