MDH2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402825

Übersicht

MDH2 kodiert die mitochondriale Malatdehydrogenase 2, ein zentrales NAD⁺-abhängiges Enzym, das im Tricarbonsäurezyklus (TCA-Zyklus) die reversible Umwandlung von Malat zu Oxalacetat katalysiert. Durch die Steuerung der mitochondrialen NADH-Produktion und der Verfügbarkeit von Oxalacetat trägt MDH2 zur Koordination des oxidativen Stoffwechsels, der Anaplerose und des Redox-Gleichgewichts bei und unterstützt biosynthetische Stoffflüsse, die an die mitochondriale Atmung gekoppelt sind. Die MDH2-Funktion ist eng mit metabolischer Reprogrammierung, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies sowie mit Signalwegen der mitochondrialen Qualitätskontrolle verknüpft, die die zelluläre Fitness unter Nährstoffmangel oder hypoxischem Stress prägen. Eine veränderte MDH2-Aktivität oder -Expression wurde mit krankheitsrelevanten Phänotypen im Zusammenhang mit mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht, darunter neurometabolische Dysbalancen und tumorassoziierte metabolische Abhängigkeiten.

Das MDH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MDH2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MDH2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MDH2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MDH2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MDH2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MDH2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MDH2-Exone abzielen, die für die MDH2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MDH2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MDH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MDH2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MDH2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MDH2 HDR-Plasmid (h) und MDH2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MDH2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MDH2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.