MCAT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-404338

Übersicht

MCAT (Malonyl-CoA:ACP-Transacylase) ist ein mitochondriales Enzym, das für die mitochondriale Fettsäuresynthese (mtFAS) erforderlich ist, indem es Malonylgruppen auf das Acyl-Carrier-Protein überträgt und so die Verlängerung von Acylketten ermöglicht, die für die Lipoinsäureproduktion genutzt werden. Über seine Rolle bei der Bildung von Lipoat unterstützt MCAT die Lipoylierung zentraler Dehydrogenasekomplexe wie der Pyruvatdehydrogenase und der α‑Ketoglutaratdehydrogenase und verbindet damit mtFAS mit dem zentralen Kohlenstoffstoffwechsel, der Redoxhomöostase und dem mitochondrialen Energiefluss. Störungen der MCAT-Aktivität können die mitochondriale Atmung und die Metabolitennutzung beeinflussen, mit nachgelagerten Effekten auf oxidativen Stress und metabolische Reprogrammierung. Diese Prozesse sind relevant für mechanistische Studien zu mitochondrialer Dysfunktion und zur Biologie stoffwechselassoziierter Erkrankungen, einschließlich Kontexten, in denen der Lipoylierungsstatus und die Funktion TCA-gekoppelter Enzyme verändert sind.

Das MCAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MCAT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MCAT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MCAT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MCAT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MCAT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MCAT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MCAT-Exone abzielen, die für die MCAT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MCAT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MCAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom MCAT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MCAT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MCAT HDR-Plasmid (h) und MCAT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MCAT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MCAT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.