MBOAT5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403597-ACT

LPCAT3 (auch bekannt als MBOAT5) kodiert eine membrangebundene O‑Acyltransferase, die über den Lands‑Zyklus Phospholipide umgestaltet, indem sie Acylketten auf Lysophosphatidylcholin überträgt und so zur Aufrechterhaltung der Membranzusammensetzung sowie der Verfügbarkeit signalaktiver Lipide beiträgt. Durch die Formung polyungesättigter Phospholipid-Pools beeinflusst MBOAT5 membranabhängige Prozesse wie vesikulären Transport, Rezeptorsignalgebung und oxidative Stressantworten, die mit der Empfindlichkeit gegenüber lipidperoxidationsbedingten Schäden verknüpft sind. Eine veränderte Phospholipid-Remodellierung wurde mit metabolischen und entzündlichen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch MBOAT5 ein relevanter Ansatzpunkt für die Untersuchung der Lipidhomöostase und von Stressanpassungsprogrammen ist. Die funktionelle Analyse dieses Signalwegs wird häufig in Modellen für Leber- und kardiometabolische Dysfunktion, Immunaktivierung sowie lipidgetriebene Zellzustandsübergänge eingesetzt.

MBOAT5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LPCAT3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MBOAT5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LPCAT3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LPCAT3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MBOAT5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LPCAT3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MBOAT5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MBOAT5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LPCAT3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.