Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MaxiKα Double Nickaseプラスミド (h): sc-402208-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- MaxiKα Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- MaxiKαダブルニカースプラスミド（h）およびMaxiKαダブルニカースプラスミド（h2）は、KCNMA1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: MaxiKα 抗体 (B-1): sc-374142
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
MaxiKα Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402208-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MaxiKα Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402208-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNMA1は、ヒトのMaxiKα（BK、KCa1.1）と呼ばれる大コンダクタンスの電位依存性／Ca2+活性化カリウムチャネルのαサブユニットをコードしており、膜興奮性と細胞内カルシウムシグナル伝達の中枢的な制御因子です。MaxiKαは、細胞質内Ca2+濃度の上昇と脱分極をK+の流出に結び付けることで、活動電位の再分極、神経伝達物質放出、平滑筋トーヌス、ならびに多様な細胞種におけるメカノトランスダクションを調節します。チャネル機能はGPCRやキナーゼのシグナル伝達経路と統合され、補助β/γサブユニットや局所的なCa2+マイクロドメインによって強く修飾されます。KCNMA1活性の異常やチャネルゲーティングの変化は、てんかんや運動障害などの神経学的表現型に加え、心肺研究に関連する血管および気道の生理機能変化とも関連付けられています。
MaxiKα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における KCNMA1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、KCNMA1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、KCNMA1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、KCNMA1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。