MAVS CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400769-ACT

MAVS (mitochondriales antivirales Signalprotein) ist ein an den Mitochondrien verankerter Adapter, der die Erkennung von RNA-Viren durch RIG-I (DDX58) und MDA5 (IFIH1) an nachgeschaltete Signalwege der angeborenen Immunität weiterleitet. Nach Aktivierung initiiert MAVS prionenähnliche Assemblies, die Adapter der TRAF-Familie rekrutieren und TBK1/IKK-Komplexe aktivieren, wodurch die Transkriptionsprogramme von IRF3/IRF7 und NF-κB angestoßen werden. Dieser Signalweg induziert Typ-I-Interferone und inflammatorische Zytokine, die antivirale Restriktion, den Immunmetabolismus und programmierte Zelltodantworten prägen. Eine fehlregulierte MAVS-Signalgebung wird mit aberranten Interferon-Signaturen und chronischer Entzündung in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext viraler Mechanismen zur Immunflucht untersucht.

MAVS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MAVS-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MAVS Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MAVS-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MAVS-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MAVS-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MAVS-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MAVS-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MAVS-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MAVS-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.