Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421601

Übersicht

Cma1 kodiert die Maus-Mastzellprotease 5, eine Serinprotease der Chymase-Familie, die in sekretorischen Granula von Mastzellen des Bindegewebstyps gespeichert und bei FcεRI-vermittelter Degranulation freigesetzt wird. Mastzellprotease 5 ist an der Umgestaltung der extrazellulären Matrix sowie an der Regulation vasoaktiver und proinflammatorischer Mediatoren beteiligt, indem sie Peptide und zytokinbezogene Substrate proteolytisch verarbeitet und so die Rekrutierung von Leukozyten und Gewebereaktionen mitprägt. Über diese Aktivitäten trägt sie zu Signalwegen bei, die allergischer Entzündung, Hyperreagibilität der Atemwege und Gewebefibrose zugrunde liegen, und wird häufig in Modellen kutaner Entzündung sowie des kardiopulmonalen Remodellings untersucht. Eine veränderte Aktivität der Mastzellprotease 5 wurde in entzündlichen Krankheitskontexten mit Veränderungen der angeboren–adaptiven Immun-Crosstalks und der Homöostase von Barrieregeweben in Verbindung gebracht.

Das Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cma1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cma1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cma1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Mast Cell Protease 5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cma1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Mast Cell Protease 5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cma1-Exone abzielen, die für die Mast Cell Protease 5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cma1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Mast Cell Protease 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cma1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Mast Cell Protease 5 HDR-Plasmid (m) und Mast Cell Protease 5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cma1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cma1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.