MARCH9 Double Nickase Plasmid (h): sc-410240-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das MARCH9 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- MARCH9 Double-Nickase-Plasmid (h) und MARCH9 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MARCH9 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
MARCH9 Double Nickase Plasmid (h) | sc-410240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MARCH9 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-410240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH9 kodiert eine membranassoziierte RING-CH-E3-Ubiquitin-Ligase, die in endomembranären Kompartimenten lokalisiert und den Proteinumsatz durch ubiquitinabhängige Sortierung und Degradation reguliert. Durch die Katalyse der Ubiquitinierung ausgewählter Membranproteine trägt MARCH9 zum endozytischen Transport, zur lysosomalen Zielsteuerung und zu Qualitätskontrollprozessen bei, die die Rezeptorverfügbarkeit und die Dynamik intrazellulärer Signalübertragung prägen. Diese Aktivitäten verknüpfen MARCH9 mit Signalwegen, die die Regulation immunrelevanter Membranproteine und die zelluläre Homöostase steuern, wobei eine veränderte Funktion der Ubiquitin-Ligase Stressantworten und die Umgestaltung des Zelloberflächen-Proteoms beeinflussen kann. Eine Dysregulation der Ubiquitinierung und des Traffickings von Membranproteinen ist relevant für mechanistische Studien zur Immun-Signalgebung, zu infektionsassoziierten Wirtsantworten und zu umfassenderen Störungen der Proteostase, wie sie in unterschiedlichen Krankheitskontexten beobachtet werden.
MARCH9 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MARCH9-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MARCH9 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MARCH9-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MARCH9-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.