Particules Lentivirales d'Activation (h) MAGE-C1: sc-403336-LAC

MAGEC1 code pour MAGE-C1, un antigène cancer/testis de la famille des antigènes associés au mélanome (MAGE), dont l’expression est restreinte aux cellules germinales normales et fréquemment induite dans les cancers. MAGE-C1 est impliqué dans la régulation de l’homéostasie protéique et des voies de signalisation adaptatives au stress, via des interactions pouvant moduler des processus dépendants de l’ubiquitine ainsi que des programmes de contrôle transcriptionnel. Une expression aberrante a été rapportée dans de multiples contextes tumoraux, incluant des cancers hématologiques et des tumeurs solides, où MAGE-C1 est étudié à la fois comme marqueur de l’état des cellules tumorales et comme antigène pertinent pour la présentation antigénique et la réponse immunitaire. En tant que produit d’un gène humain, MAGE-C1 constitue un point d’entrée utile pour analyser la dérépression épigénétique, des programmes transcriptionnels associés aux lignages, et des voies de protéostasie liées à des phénotypes oncogéniques.

Les particules d'activation lentivirales MAGE-C1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAGEC1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MAGE-C1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAGEC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MAGE-C1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAGEC1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.