Plasmide CRISPR d'Activation (h) MAGE-C1: sc-403336-ACT

Le gène humain **MAGEC1** code **MAGE-C1**, un antigène cancer/testis principalement restreint aux cellules germinales, mais fréquemment réexprimé dans les cancers, où il peut moduler des programmes cellulaires tumoraux associés à la survie et à la reconnaissance immunitaire. MAGE-C1 appartient à la famille des MAGE de type I et a été associé à des voies de signalisation dépendantes de l’ubiquitine via des interactions avec des ligases E3 de l’ubiquitine à domaine RING, influençant la stabilité des protéines et les voies de réponse au stress. Une expression dérégulée de **MAGEC1** a été rapportée dans des contextes de tumeurs hématologiques et solides, et il est couramment utilisé comme marqueur moléculaire de l’expression antigénique et des états transcriptionnels en biologie tumorale. L’étude de MAGE-C1 soutient les recherches sur la présentation antigénique, la régulation de la protéostase et les mécanismes de contrôle transcriptionnel pertinents pour les phénotypes oncogéniques.

MAGE-C1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MAGEC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MAGE-C1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MAGEC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MAGEC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MAGE-C1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MAGEC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MAGE-C1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MAGE-C1 dans les cellules tumorales présentant une expression de MAGEC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.