Plásmido CRISPR de Activación (h) MAD2: sc-401027-ACT

El gen humano **MAD2L1** codifica **MAD2**, un componente central del punto de control del ensamblaje del huso que supervisa la unión cinetocoro–microtúbulo y retrasa el inicio de la anafase hasta que los cromosomas logran la bi-orientación. MAD2 participa en la formación del complejo de control mitótico para inhibir la actividad de **APC/C-CDC20**, coordinando así la estabilidad de la ciclina B y la securina, la segregación cromosómica y el mantenimiento de la integridad genómica. La desregulación de la expresión de MAD2L1 o de la señalización del punto de control puede favorecer la inestabilidad cromosómica y la aneuploidía, características observadas con frecuencia en la biología de enfermedades proliferativas. Por ello, MAD2L1 se estudia ampliamente en vías que controlan la progresión del ciclo celular, la sincronización mitótica y la vigilancia del genoma.

MAD2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAD2L1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

MAD2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAD2L1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAD2L1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de MAD2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAD2L1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de MAD2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía MAD2 en células tumorales con expresión de MAD2L1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.