LRRK2 Lentiviral Activation Particles (m): sc-426167-LAC

Leucinreiche Repeat-Kinase 2 (LRRK2) ist eine multidomänige Ser/Thr-Kinase und GTPase, die intrazelluläre Signalprozesse koordiniert, die mit Vesikeltransport, endolysosomaler Homöostase, Zytoskelettdynamik und Autophagie verknüpft sind. In Mauszellen ist LRRK2 in Rab-GTPase-Phosphorylierungsprogramme eingebunden und trägt zur Regulation des Membrantransports sowie der Qualitätskontrolle von Organellen in Neuronen und Immunzelllinien bei. Eine Störung der LRRK2-Aktivität wird häufig genutzt, um Mechanismen zu modellieren, die für die Biologie der Parkinson-Krankheit relevant sind, darunter veränderte lysosomale Funktion, neuroinflammatorische Signalwege und Stressantworten. Als Knotenpunkt in Signalwegen liefert LRRK2 einen gut handhabbaren Readout für Kinase-Signalgebung, Vesikeltransport-Phänotypen und transkriptionelle Anpassungen in krankheitsrelevanten Zelltypen.

LRRK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Lrrk2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LRRK2 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Lrrk2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LRRK2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Lrrk2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.