Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRK2 (m): sc-426167
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- LRRK2 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique LRRK2, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: LRRK2 Antibody (133AT1218): sc-130159
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRK2 (m) | sc-426167 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Lrrk2 code la kinase 2 à répétitions riches en leucine (LRRK2), une sérine/thréonine kinase multidomaine dotée d’une activité GTPase, qui intègre des signaux au niveau des compartiments endomembranaires. Dans les cellules murines, LRRK2 module le trafic vésiculaire et l’homéostasie endolysosomale via la phosphorylation des GTPases Rab, influençant l’autophagie, la dynamique du cytosquelette et le transport des organites. La fonction de Lrrk2 s’articule avec la signalisation immunitaire innée et inflammatoire dans les lignées myéloïdes, en modulant les réponses au stress cellulaire. La dérégulation des voies liées à LRRK2 est largement étudiée dans la neurodégénérescence, en particulier pour des mécanismes pertinents dans la maladie de Parkinson, ainsi que dans des modèles d’altération de la fonction lysosomale et de neuroinflammation.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO LRRK2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lrrk2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lrrk2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lrrk2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine LRRK2.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lrrk2 pour l'étude de la signalisation de LRRK2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Lrrk2 essentiels à la fonction de LRRK2
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lrrk2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le LRRK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le LRRK2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lrrk2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le LRRK2 plasmide HDR (m) et le LRRK2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lrrk2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lrrk2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.