LRP6 Double Nickase Plasmid (m): sc-421466-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LRP6 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LRP6 Double-Nickase-Plasmid (m) und LRP6 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lrp6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LRP6: sc-25317
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LRP6 Double Nickase Plasmid (m) | sc-421466-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP6 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421466-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Lrp6* kodiert das LDL-Rezeptor-verwandte Protein 6 (LRP6), einen Single-Pass-Korezeptor, der für die kanonische Wnt/β‑Catenin-Signalübertragung essenziell ist. Nach Bindung eines Wnt-Liganden ist LRP6 an der Bildung des Signalosoms zusammen mit Frizzled-Rezeptoren beteiligt, fördert die Stabilisierung von β‑Catenin und aktiviert nachgeschaltete Transkriptionsprogramme, die die embryonale Musterbildung, das Verhalten von Stamm- und Vorläuferzellen sowie die Gewebehomöostase regulieren. Die Aktivität von LRP6 überschneidet sich zudem mit Signalwegen, die Zellpolarität und Rezeptor-Trafficking steuern, und prägt dadurch kontextabhängige Signalausgänge. Eine fehlregulierte, LRP6-abhängige Wnt-Signalgebung wurde in mehreren krankheitsrelevanten Modellen mit Entwicklungsstörungen und verändertem Gewebeumbau in Verbindung gebracht, was *Lrp6* zu einem häufig untersuchten Knotenpunkt in der Signalwegbiologie macht.
LRP6 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lrp6-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lrp6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lrp6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lrp6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.