LRP16 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405616

Übersicht

MACROD1 kodiert LRP16, ein nukleäres Protein mit Macrodomain, das ADP-Ribose bindet und als „Eraser“ der Mono-ADP-Ribosylierung an Zielproteinen fungiert. LRP16 ist an der Regulation von Transkriptionsprogrammen und chromatinassoziierten Prozessen beteiligt, einschließlich der Wechselwirkung mit der Signalübertragung nukleärer Hormonrezeptoren sowie PARP-abhängigen ADP-Ribosylierungswegen, die die DNA-Schadensantwort beeinflussen. Über diese Aktivitäten kann MACROD1 die Zellzykluskontrolle, Stresssignale und die Aufrechterhaltung der genomischen Stabilität beeinflussen. Eine veränderte Expression oder Funktion von MACROD1/LRP16 wurde in mehreren Tumorkontexten beschrieben und wird häufig im Zusammenhang mit Proliferation, Überlebenssignalen und transkriptioneller Umprogrammierung untersucht.

Das LRP16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MACROD1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MACROD1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MACROD1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LRP16-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MACROD1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LRP16-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MACROD1-Exone abzielen, die für die LRP16-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MACROD1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LRP16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom LRP16 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MACROD1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LRP16 HDR-Plasmid (h) und LRP16 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MACROD1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MACROD1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.