Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LRP Double Nickase Plasmid (h): sc-401589-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LRP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LRP Double-Nickase-Plasmid (h) und LRP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf MVP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LRP: sc-23916
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LRP Double Nickase Plasmid (h) | sc-401589-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LRP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401589-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das Major-Vault-Protein (MVP), auch als lung resistance-related protein (LRP) bezeichnet, ist die wichtigste strukturelle Komponente von Vault-Ribonukleoprotein-Partikeln, die am nukleozytoplasmatischen Transport, an der Signalintegration und an zellulären Stressantworten beteiligt sind. MVP wird mit der Modulation von PI3K/AKT-, MAPK- und NF-κB-assoziierten Signalwegen in Verbindung gebracht und kann über Interaktionen mit mehreren Adapterproteinen Endozytose, Autophagie und die angeborene Immun-Signalgebung beeinflussen. Durch seine Wirkung auf den intrazellulären Transport und den Umgang mit Xenobiotika wird MVP häufig im Kontext von Multidrug-Resistance-Phänotypen, Überlebensprogrammen von Tumorzellen und der Regulation von Entzündungen untersucht. Eine veränderte MVP/LRP-Expression wurde zudem in verschiedensten Krebsarten sowie bei neurologischen und immunassoziierten Erkrankungen beschrieben, was seinen Einsatz als mechanistischer Knotenpunkt in pathway-orientierter Forschung unterstützt.
LRP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des MVP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von MVP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die MVP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit MVP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.