LOXL4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426632

Übersicht

Loxl4 kodiert für Lysyl-Oxidase-like 4 (LOXL4), eine kupferabhängige Aminoxidase, die die oxidative Desaminierung von Lysinresten in Kollagen und Elastin katalysiert und dadurch die kovalente Quervernetzung sowie Stabilisierung der extrazellulären Matrix (ECM) fördert. Durch ECM-Remodeling beeinflusst LOXL4 Zelladhäsion, Migration und Mechanotransduktionsprogramme, die mit Gewebeentwicklung und -reparatur verknüpft sind. Eine veränderte Aktivität der LOXL-Familie wurde mit fibrotischem Umbau und Veränderungen der Architektur der Tumormikroumgebung in Verbindung gebracht, wodurch Loxl4 für die Untersuchung der ECM-getriebenen Regulation von Entzündung, Gefäßbiologie und epithelial-mesenchymalen Dynamiken relevant ist. In Mausmodellen unterstützt eine Störung von Loxl4 mechanistische Arbeiten zur Homöostase des Bindegewebes und zu matrixabhängigen Signalwegen.

Das LOXL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Loxl4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Loxl4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Loxl4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die LOXL4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Loxl4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der LOXL4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Loxl4-Exone abzielen, die für die LOXL4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Loxl4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom LOXL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom LOXL4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Loxl4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das LOXL4 HDR-Plasmid (m) und LOXL4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Loxl4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Loxl4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.