Plasmide Double Nickase (m) LKB1: sc-423192-NIC

Le gène murin **Stk11** code la kinase sérine/thréonine **LKB1**, un régulateur central de l’homéostasie énergétique et de la polarité cellulaires, qui active **AMPK** ainsi qu’un large ensemble de kinases apparentées à AMPK. Par le biais de cet axe de signalisation, LKB1 coordonne les réponses au stress métabolique, la fonction mitochondriale, l’autophagie et le contrôle du cycle cellulaire, et contribue au maintien de l’architecture épithéliale via des complexes de polarité. La perturbation des voies dépendantes de LKB1 est associée à une altération du contrôle de la croissance et à une reprogrammation métabolique, faisant de **Stk11** un nœud clé dans les études de biologie des suppresseurs de tumeur. Dans les modèles murins, la perturbation de LKB1 est largement utilisée pour examiner la régulation tissu-spécifique du métabolisme, le comportement des cellules souches et l’adaptation au stress du microenvironnement.

LKB1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Stk11 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Stk11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Stk11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Stk11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.