Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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LKB1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423192-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das LKB1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- LKB1 Double-Nickase-Plasmid (m) und LKB1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Stk11 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: LKB1: sc-32245
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
LKB1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423192-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
LKB1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423192-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Stk11 kodiert die Serin/Threonin-Kinase LKB1, einen zentralen Regulator der zellulären Energiehomöostase und Polarität, der AMPK sowie ein breites Spektrum AMPK-verwandter Kinasen aktiviert. Über diese Signalachse koordiniert LKB1 Antworten auf metabolischen Stress, die Mitochondrienfunktion, Autophagie und die Kontrolle des Zellzyklus und trägt über Polarititätskomplexe zur Aufrechterhaltung der epithelialen Architektur bei. Eine Störung LKB1-abhängiger Signalwege ist mit veränderter Wachstumskontrolle und metabolischer Umprogrammierung verbunden, wodurch Stk11 zu einem wichtigen Knotenpunkt in der Erforschung der Tumorsuppressor-Biologie wird. In Mausmodellen werden Eingriffe in LKB1 häufig genutzt, um die gewebespezifische Regulation des Stoffwechsels, das Verhalten von Stammzellen und die Anpassung an Stress aus der Mikroumgebung zu untersuchen.
LKB1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Stk11-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Stk11 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Stk11-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Stk11-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.